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Inclusion Cellules sur filtres en polycarbone

Est-ce que quelqu’un peut m’indiquer s’il existe des moules pour inclure en épon des cellules cultivées sur filtres en polycarbone. Nadira

Si j’ai bien compris : Les petits filtres (inserts de culture cellulaire) sont fixés dessus-dessous par glutaraldéhyde comme d’habitude. Ils sont découpés de leur inserts avec une pointe fine, post-fixés OsO4 comme d’habitude. A la fin dans l’eau, on découpe des bandelettes fines de 1 à 2 mmm de large (longueur sans importance) qui passeront dans les bains d’alcool et d’Epon. A la fin une série de bandelettes (3 à 4, difficile de faire plus) est allongée dans le moule à plat (*) les unes sur les autres, le sens importe peu. Bien les plaquer au fond sans les abimer. Polymériser ainsi. On se débrouille ensuite pour sectionner transversalement les 3 ou 4 bandelettes au niveau où elles sont assez serrées les unes contre les autres. Mais elles sont toujours assez loin les unes des autres (à l’échelle de la microscopie). Si on positionne les bandelettes dans la diagonale de la coupe on augmente le profil observé de racine de 2 !

(*) type 21 chez http://www.tedpella.com/embed_html/... Je n’ai pas d’action, c’est un exemple. Pierre

J’utilise des tube eppendorf de 0.5ml, le diamètre est compatible avec le mandrin du porte objet de l’ultramicrotome. Je découpe les filtres en languettes plus hautes que larges et un peu en pointe à l’extremité qui sera au fond du tube, afin qu’elles puissent tenir verticalement dans le tube. Ainsi il y a assez d’épon de part et d’autre. Lorsque je prépare le pyramide je m’arrange pour laisser de l’épon tout autour ou au moins sur trois faces, pour limiter la décohésion à l’interface filtre/résine. Isabelle P