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Foire Aux Questions

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Refroidissement du MET

Question : L équipement qui me permet d assurer le refroidissement de mon MET en circuit fermé présente quelques disfonctionnements. Il n est pas tout jeune et mon installation n est pas bien optimisée (située dans un petit cabanon à l extérieur du bâtiment où la température peut monter à 40°C l été&) Je suis en prospection pour l achat d un appareil, ou d un nouveau système. J ai déjà quelques devis et propositions, mais j aurais aimé vous solliciter pour avoir quelques informations et savoir comment (...)

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Immunomarquages en MET de protéines membranaires

Nous cherchons à réaliser des immunomarquages en MET de protéines membranaires (en surface, ou trans ou sous la membrane), ou cytoplasmique sur une monocouche de cellules endothéliales cornéennes situées en surface d’un tissu. Ces cellules sont donc facilement accessibles. Nous réalisons couramment des immunomarquages en microscopie optique nous réalisons couramment de la MET sur ces cellules Nous souhaitons désormais combiner les 2 pour confirmer la localisation subcellulaire de certains antigènes. (...)

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"Choisir un MEB environnemental ou à pression partielle

Thierry : je suis en quête d’avis et d’expériences concernant la "pertinence" ou non de choisir un MEB environnemental ou à pression partielle pour pouvoir observer des détails de structure de micro-organismes sans aucune préparation préalable des échantillons. J’ai beau rechercher des informations sur les performances de ce type d’appareil à ce sujet chez les principaux constructeurs, je ne trouve pas grand chose et ils ne semblent d’ailleurs pas en faire un argument de vente majeur (inquiétant (...)

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J’aimerais savoir si il est possible d’observer des liposomes directement en coloration négative ?

J’aimerais savoir si il est possible d’observer des liposomes directement en coloration négative ? si oui quel agent contrastant est le mieux adapté ? y-a-t-il des précautions des "trucs" spécifiques à faire ou ne pas faire ? Christine D’apres ce que je sais de ce qu j’ai appris avec Jacqueline Boumendil..( de notre redaction de livre préparation), ..cela peut se faire par coloration négative à l’acide phosphotungstique. Jeanne La réponse est oui. Membrane de carbone (sans formvar, je dirai (...)

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Peut-on faire des colorations négatives sur du matèriel fixé à la glutaraldéhyde pour inactiver le Virus de l’Hépatite C ?

Pierre Contraste négatif en microscopie électronique Liste de livres utiles Classement de * à *** selon l’intérêt Negative staining and cryoelectron microscopy, 1997, J. Robin Harris. *** BIOS Scientific Publishers Ltd ISBN 1 85996 120 7 Negative Staining, 1990, Sara E. Miller & M.A. Hayat * McGraw-Hill, Inc ISBN 0 07 027322 7 Electron microscopy in molecular biology, a practical approach, 1987, J. Sommerville & U. Scheer *** IRL Press ISBN 0 947946 54 3 A manual of applied (...)

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Connaisssez-vous une méthode pour inclure quelques µl de nanoparticules.

Connaisssez-vous une méthode pour inclure quelques µl de nanoparticules (liposomes de 0.2 à 1µm) ? Didier Es-tu sûr que ce soit la bonne méthode que de vouloir inclure des liposomes ? Amicalement P-Yves J’ai l’habitude d’inclure des bactéries avec une methode particulière mais qui donne d’assez bon résultats. Pour cela je centrifuge mon eppendorf, j’enlève le surnageant, j’y mets le fixateur et j’homogenise. A la fin de la fixation je recentrifuge pour enlever le surnageant et je prépare une gelée d’agar (...)

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Avez vous testé une résine à faible viscosité qui doit permettre de remplacer le spurr.

Avez vous testé une résine à faible viscosité qui doit permettre de remplacer le spurr nottament chez nos végétaux et matériels difficiles à impregner ? je voudrais me débarasser du Spurr...résine molle cassante dans sa nouvelle version (2 kits testés) Didier Pour remplacer le Spurr qui ne me contentait pas pleinement, j’ai essayé et adopté le kit embed 812/DER736 KIT (catalogue EMS, je l’achète chez Deltasciences) et en suis très contente, il est comparable aux résultats de l’épon tout en ayant un gros (...)

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"Black peppe"r sur coupe

En microscopie électronique à transmission j’observe un précipité (petit point noir de 10nm environ) sur tous mon échantillon sauf sur la résine. Je fixe avec un mélange glut + tampon cacodylate et je post-fixe à l’osmium 1% + du tampon cacodyle à 0,05M final ; Cyrielle Ce type de contamination est classique en microscopie électronique. Il y a effectivement deux types de contamination, la première appelée contamination de coloration, la seconde contamination de fixation. Ces deux termes ne sont que (...)

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recycleur d’eau pour MET

Le microscope électronique à transmission (CM10) dont j’ai la charge actuellement est refroidi par un système à eaux perdues...pour des raisons évidentes, je souhaite évoluer vers l’installation d’un système de refroidissement fermé comprenant un recycleur à eau. Mais j’ignore à quel fournisseur m’adresser. Certains d’entre vous sauront certainement me communiquer des noms (société ? nom du commercial ? ). Marie-Jeanne Nous refroidissons 2 MET avec un seul NESLAB HX 300 (2 pompes séparées) refroidi à eau (...)

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complex immnun outcherlony

J’ai une demande d’observation en Me d’un complexe immun ( albumine de boeuf- anti corps anti albumine) d’après l’expérience d’Oucherterlony réalisée sur gélose. Quelqu’un parmi vous a-t-il une expérience ou des conseils a donner pour imager ce complexe en MET. Isabelle AB 15/02/2011 Quelle idée curieuse ! L’albumine est trop petite (67 kDa) et ne se voit pas en ME. On s’en sert d’ailleurs de la BSA très diluée pour rendre les grilles hydrophiles. Donc si l’observation des Ig est hautement possible (...)

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Cu dans chloroplastes 1 en MET

..Un de mes utilisateurs végétalistes voudrait faire de l’analyse X en TEM, il voudrait analyser du cuivre dans ses chloroplastes... Est-ce que quelqu’un serait équipé pour faire cela, le plus proche possible de Montpellier ? Chantal Pas vraiment un bon plan. Trop de Cu dans le microscope (le pic sera énorme même sur grille C, Au ou Ni), trop peu de Cu dans les chloroplastes et très dilué ! A oublier. Pierre Les analyses qualitative et/ou quantitative du Cu dans les échantillons biologiques sont (...)

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Inclusion Cellules sur filtres en polycarbone

Est-ce que quelqu’un peut m’indiquer s’il existe des moules pour inclure en épon des cellules cultivées sur filtres en polycarbone. Nadira Si j’ai bien compris : Les petits filtres (inserts de culture cellulaire) sont fixés dessus-dessous par glutaraldéhyde comme d’habitude. Ils sont découpés de leur inserts avec une pointe fine, post-fixés OsO4 comme d’habitude. A la fin dans l’eau, on découpe des bandelettes fines de 1 à 2 mmm de large (longueur sans importance) qui passeront dans les bains d’alcool (...)

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inclusions cult cel feuillets plissés

je souhaiterais faire des inclusion de cellules pour voir des jonctions cellulaires mais pas en monocouche. on m’a parlé de la technique du feuillet plissé : on scrappe les cellules pour conserver des feuillets de cellules jointives. Certains d’entre vous utilisent-ils cette technique ? A quel moment faut-il scrapper les cellules ? j’ai essayé de le faire juste avant l’étape de polymerisation mais résultat décevant ...Benoit La bonne méthode est celle décrite par Arnold et Boor dans JUMSR en 1986 (...)

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membrane de formvar

Mars 2011 Je m’adresse à vous tous suite à des problèmes assez récurrents que je rencontre avec mes films butvar et/ou formvar. _La technique que j’utilise pour la réalisation de ces films est la suivante :_ - préparation des solutions à 1% dans du chloroforme en volume conséquent (250mL, solutions conservées à RT à l’abri de la lumière pour utilisations futures), agitation sur la journée pour une meilleure dissolution - utilisation de lame "pearl" prénettoyées avec simple essuyage avec du (...)

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Neutralisation du gluta

Que pensez vous de "neutraliser" le gluta et le PFA avec de la BSA ou autre amine, pour pouvoir les éliminer en déchets non toxiques ? Le faîtes-vous dans vos labo et si oui, comment vérifiez-vous que tous les groupements aldéhydes ont réagi ? Lysiane Je pense qu’il faudra beaucoup, mais vraiment beaucoup de BSA pour neutraliser PFA et glutaraldéhyde. Et vu le prix de la BSA (même la moins chère), il va falloir demander un budget conséquent. Et finalement le mélange aldéhyde BSA va former une pate (...)

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Observation du foie en MEB

Avant cette fin d’année, je sollicite votre aide. Sauriez-vous comment observer en MEB sur des morceaux de foie de rongeur : les canalicules biliaires les sinusoïdes hépatiques Auriez-vous des exemples d’images à me prêter ? Virginie A part la cryofracture je ne vois pas. Il existe une méthode "antédiluvienne", pour ceux qui n’ont pas de platine cryo, mais qui donne de bons résultats pour le foie : Prendre de petits bouts de foie fixés au gluta et rincés, ne pas faire d’osmium car la fracture (...)

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Observation surface de feuille

Je cherche un protocole de préparation d’échantillon pour observer la surface d’une feuille de plante (capucine) en MEB. Merci d’avance pour votre aide .Nicolas S Si vous disposez d’un MEB à pression contrôlée, rien de plus simple, pas de préparation. Il est préférable d’avoir également une platine refroidie par effet peltier.je peux dans ce cas vous donner quelques indications pour choisir la pression dans la chambre du MEB ? sinon en haut vide il faut un protocole de fixation ,déshydratation (...)

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probleme inclusion muscle et nerf

j’ai un souci dans un protocole d’inclusion de muscles et de nerfs (caco, gluta, oso4 , ethanol, oxyde de prop, epon) les semi fines (1micron) sont frippées au niveau du tissus j’ai changé de kit de résine le problème se pose à nouveau ; Didier Il faudra tester plusieurs options (la seconde est plus rapide) 1- fais varier la vitesse de coupe de ton ultramicrotome , si tu les fait manuellement tu ne peux pas contrôler ta vitesse de coupe 2 - Utilise un cure-dent ou tige en bois imbibé de (...)

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surfixation gluta

Avant d’être évacué, j’avais fixé des cyanobactéries au gluta (2,5%) dans du cacodylate de sodium en présence ou pas de bleu alcyan et de rouge de ruthénium (cf conférence de Thierry Meylheuc, Nantes 2010) pour une observation en MEB. je vais sans doute aller rincer ces échantillons par dessus les barricades (les étudiants nous laissent gérer les urgences). Ma question concerne le temps maximum de fixation de vos échantillons en gluta ? Didier La fixation dépend entre autres, de la nature et (...)

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Visualisation glycogéne

Visualisation glycogéne Je voudrais visualiser en MET du glycogène exogène (provenant du milieu de culture) dans des bactéries marines. Dans un papier, il contraste les coupes fines avec H202 et du Plomb. Je précise qu’il n’y a pas de DAB dans ce protocole. Je souhaiterai connaitre le rôle du H202 ? et sa relation par rapport au glycogène ? Sophie L’origine est Millonig & Marinozzi, 1968. Globalement il a été observé dans ces années là que le contraste au plomb après avoir enlevé l’osmium (...)

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